SDS – PAGE je postup vědci používají k oddělení proteinů na základě toho, jak se přenést přes gel . Gely jsou vyrobeny z polymeru s názvem polyakrylamid . Když uděláte polyakrylamidovém gelu , začnete se směsí chemikálií : akrylamidu , bisakrylamid , SDS a vyrovnávací chemikálie pro stabilizaci pH . Přidání persíran sloučeniny a další chemické látky zvané TEMED způsobíakrylamidu za vzniku dlouhých řetězců nebo polymeraci . Zahájení
persulfate iontů v peroxodisíranu amonného jeekvivalent dvou síranových iontů spojených slabou vazbu kyslík-kyslík . Tato vazba může štěpit nebo zlomit na dvě , čímž se získá sulfátové zbytky — vysoce reaktivní molekuly s nepárový elektron . Síran radikál může reagovat s vodou pro vytvořeníhydroxy-skupinu , nebo může reagovat s monomerem akrylamidu spustit polymerační reakce . TEMED působí jako katalyzátor, který urychluje rychlost , při které Persulfate ionty tvoří radikály .
Chain Reaction
jednouhydroxyl nebo síranem radikál je tvořen , to napadne akrylamidu monomer , přičemž jeden z elektronů v dvojné vazby . Akrylamid monomer je nyní zbytek s nepárový elektron , tak se pokračuje k průniku na jiný monomer akrylamidu podobným způsobem . Tato série akcí se vytvoří rychle rostoucí řetězec akrylamidu monomerů spojených jednoduchými vazbami . Řetězová reakce skončí pouze tehdy, když dva radikály reagují s sebou .
Cross – Linking
Pokud akrylamidu byly přítomny na jeho vlastní , to by se netvoří hustý gel , co potřebujete pro SDS-PAGE . Polymery musí být cross- spojeny za vzniku gelu s odpovídajícími vlastnostmi , a to je místo, kde bisakrylamid vypovídací dvojných vazeb v bisakrylamid také sloužit jako cíl pro radikály v reakci , a proto, že má dvě místa , kde mohou být zaútočil radikály , je to nakonec začleněna do dvou rostoucích polymerů . V důsledku toho , že polymery skončit s příčných vazeb mezi nimi na náhodných místech po délce každého řetězce .
Úvahy
polymerační reakce je velmi rychlá , takže jakmile vás “ jsem přidal TEMED a peroxosíran , se bude konat velmi rychle . Čistota vašich činidel je důležité, protože nečistoty mohou ovlivnit vaše výsledky . Kyselina akrylová , například , mohou být přidány do polymeru a tvoří iontů stránky, které by mohly způsobit místní změny pH na svém gelu . Výsledný gel se může ještě obsahovat určité akrylamidu monomer , a akrylamid jeneurotoxin , takže vždy přijmout vhodná bezpečnostní opatření při práci s SDS gely .