Při vytváření vazby nukleových kyselin nebo proteinů ,high – spojovací materiál nazvaný PVDF ( polyvinyl difluoride ) membrána poskytuje podporu pro protilátek . Prostřednictvím Western blotting , membrány jsou naskládány dohromady , připravené pro protilátky a pak se vysuší . Protokol pro sušení membránu vyžaduje znalosti o tom, jak membrány fungují , katodové desky , anoda desky a aplikace methanolu řešení . Se správným protokolem ,membrána bezpečně váže se na specifickou protilátkou a je připraven k okamžitému použití nebo skladování . Příprava membrány
Příprava na PVDF membránu čistí a stabilizuje membrány před převodem . Před sušením ,membrána je “ blokován “ , aby se zabránilo vázání od nic jiného, než zvláštní nukleových kyselin, jako je například nespecifické protilátky . Při tomto postupu mokré membránu , kterým jej na rovný povrch pokrytý v methanolu . Membrána mění barvu během této věty , z neprůhledné na poloprůhledné . Po dokončení se methanol ,membrána je umístěna v deionizované vodě máčet po dobu přibližně dvou minut. Membrána pak musí namočit znovu do roztoku methanolu , který je velmi kyselá .
Klipart shromáždění membrány před přenosem
Dva z membránových papíry jsou namočené v prvním roztoku methanolu a umístí na anodovou deskou . Během tohoto procesu , je třeba pečlivě zkontrolovat pasti bublin , které by mohly ohrozit přenos . Další kus filtračního papíru se namočí v druhém roztoku methanolu a umístěny v horní části zásobníku . Gel pak pokračuje v horní části membrány , s Neskřípněte vzduchové bubliny mezi aplikací gelu a membránou . Tři nové kousky papíru se pak namočí do katodového pufru a umístěny v horní části gelu . Vyskytne-li se vzduch bublání ,zkumavka se snaží vyhladit membrány .
Převod
V této části procesu , připojení vysokého napětí kabely k napájení a uplatňují konstantní proud do gelu oblasti na membráně po dobu 30 minut . Doba přenosu se bude lišit v závislosti na typu protilátky . Po 30 minutách , můžete odstranit napájení a přenosu membránu . V pravém dolním rohu membrány je pak řez zkontrolovat orientaci . První dvě vrstvy filtračního papíru, jsou vyřazeny , včetně gelu . Kapely z molekulové hmotnosti jsou označeny kuličkovým perem .
Sušení
Jakmile je přenos dokončen , můžete sušit membránu v jednom ze dvou způsobů . Pro rychlejší sušení ,membrána se namočí do 100 procent methanolu po dobu 10 sekund , aby se odstranil vodu . Membrána pak spočívá na kus papírového ručníku po dobu 15 minut . Pro pomalejší metody sušení ,membrána se umístí na papírový ručník bez přidání methanolu . Po usušení může býtmembrána užívaných nebo skladovaných v suché nádoby na 4 stupňů Celsia pro budoucí použití .