Western blot , analytické technice určit specifický protein v daném vzorku , využívá schopnost enzymu nebo fluorescenčně značené primární protilátky vázat se svým specifickým antigenem . Jedná se o třístupňový proces začínající gelu , následované membrány blot a sondování pomocí protilátek . Detekce protein může být přímé nebo nepřímé , přičemž posledně pomocí značené sekundární protilátky namířené proti primární. I když přijal jako rutinní analýzy proteinů technikou , western blot má svá omezení , stejně jako výhody. Výhoda: Citlivost
Jeden z největších argumentů ve prospěch Western blot , je jeho citlivost . Vzhledem ke své schopnosti detekovat za pouhých 0,1 ng proteinu ve vzorku , můžetechnika teoreticky sloužit jako efektivní časné diagnostický nástroj , snímání sebemenší imunogenní odpověď od virů nebo bakterií ve vzorku pacienta . Nepřímé western blot dále navazuje na této citlivosti od schopnosti sekundární protilátka k zesílení intenzity signálu detekovaného pomocí zobrazovacího systému . Větší citlivost znamená, že je potřeba méně protilátky pro testování, který snižuje náklady na laboratorní výrazně
Výhoda : . Specifika
western blot Technika vděčí za svou specifičnost na dvě velké přispívání faktory. Za prvé , gelová elektroforéza třídí vzorek do proteinů o různé velikosti , náboje a konformaci . Tento proces sám o sobě jeobrovský krok k detekci , jako pásy vytvořené v gelu již získá stopy o velikosti proteinu nebo polypeptidu . Specifičnost interakce protilátka-antigen slouží jako druhý velký faktor . Protože specifické protilátky ukázat afinitu pro specifické proteiny , může tento proces selektivně detekovat cílový protein i ve směsi 300000 různých proteinů
nevýhodu: . Náchylná k falešných nebo subjektivních výsledků
V zášti jeho citlivosti a přesnosti ,western blot může ještě způsobit chybné výsledky . A falešně pozitivní výsledky , kdyprotilátka reaguje s non – určené bílkovin, což je to, co často se stane, kdyžpacient testován na HIV se stane, že tuberkulóza nebo několik parazitárních infekcí . Falešně negativní , na druhé straně , může snadno dojít k větší proteiny, které nejsou k dispozici dostatek času , aby správně přenosu na membránu . Nesprávné blotting a zpracování často produkují nakřivo , vybledlé , nebo dokonce více kapel , takže výsledky testů závisí na výkladu technika
nevýhodu: . Vysoká cena a technické Poptávka
náklady na western blotu je složen z velkých individuálních výdajů na značených protilátek, kvalifikovaných analytiků a laboratorní vybavení . Delikátní proces , western blotting vyžaduje přesnost v každém kroku pro řádnou identifikaci složek vzorku je . Menší chyba v reagenční koncentrace nebo inkubační době může být katastrofální pro celý proces . Konečně,zařízení potřebná pro detekci a zobrazování – chemiluminiscenční , Zářivka, radioaktivní nebo systémy detekce laserových – může být příliš drahé pro průměrného mikrobiologie jednotky
.