Rostlina organická hmota se skládá z mnoha buněk , z nichž každá obsahuje DNA , která drží pokynů pro růst a funkci . Vědci mohou chtít studovat část nebo celý genetického materiálu v buňce , a proto je třeba , aby bezpečně extrahovat DNA z konstrukční materiál a buněčné strojního zařízení, které obklopuje it.Things budete potřebovat
2g listy
třecí misce
odstředivka
vodní lázni
rovnováhu
tenká
Six 15 ml centrifugační zkumavky
Jedna 1,5 ml zkumavka Eppendorf
100 ml CTAB extrakčního pufru klipart 2ml beta -merkaptoethanolu
7 ml 24 : 1 chloroform : isoamylalkoholu směs
50 mikrolitrů RNase A v koncentraci 10 mg /ml
pipety
6 ml isopropanolu
2 ml 70 % ethanolu se
1 ml sterilní deionizované vody
Zobrazit další pokyny
Stránka 1
Naplňte vodní lázni na doporučenou úroveň s vodou, která se mění specifikace každého výrobce , a zapněte jej . Nastavte vodní lázni 65 stupňů Celsia a nechte je přijít na teplotu . Umístěte nádobu isopropanol na ledu. Nastavte centrifugu na 3000 otáčkách za minutu při teplotě 20 stupňů Celsia .
2
odváží 2 g listů na rovnováhu a umístit je do malty . Přidejte tolik beta- merkaptoetanolu pomocí pipety do nádoby extrakčního pufru tak, aby konečný výrobek se skládá z jedno až dvě procenta beta -merkaptoethanolu . Například , pokud máte objem vyrovnávací paměti, která měří asi 100 ml , přidejte 2 ml beta- merkaptoetanolu do nádoby a důkladně promíchejte.
Sims 3
Pipeta 7 ml extrakčního pufru do malty . Rozdrtit směs do homogenní kapaliny s paličkou .
4
fold kus tenká nad tvořit čtyři vrstvy . Napětí a zmáčknout kapalinu přes vrstvy do 15 ml centrifugační zkumavky .
5
Zkumavka se vloží do vodní lázně o 30to 60 min utes . Kroužením trubice míchat jeho obsah každé čtvrt hodiny . Nechtetrubka vychladnout na pokojovou teplotu pokompletní doba je až .
6
Nejlépe setrubka s chloroformem a isoamylalkoholu směsi ( toto obsahuje 24 dílů chloroformu na jedné části isoamylalkoholu ) , takže trubice obsahuje zhruba polovina vzorku a polovina nový tekutý doplněk . Zkumavku a otočte ji vzhůru nohama několikrát pomalu, aby se tekuté směsi .
7
vložte zkumavku do centrifugy a nechat točit po dobu 10 minut .
8
Místo 50 ml RNase A do nové centrifugační zkumavky . Pipetou supernatant (jasný vrstvy v horní části trubice nad bílou vrstvou trosek ) v první zkumavky off a přesunout ji do druhé zkumavky . Zkumavku a obraťte ji několikrát aby se obsah promíchal dohromady. Držte tubu při pokojové teplotě po dobu jedné hodiny .
9
Proveďte kroky 6 a 7 znovu dvakrát , takže budete mít jasnou zkumavky . Pak napipetuje do 9 ml čiré kapaliny z konečné trubky do nové zkumavky . Se přidá 6 ml isopropanolu a invertní trubkami 10 krát v mírném způsobem, takžeDNA vypadne z roztoku a do pevné formy . Poté se odstřeďuje na trubici po dobu 10 minut , což by mělo vytvořit peleta DNA na dně zkumavky .
10
tuhnutí z kapaliny v trubici , takžepeleta zůstává . Pipeta ve 2 ml 70 % ethanolu a místo zpět v odstředivce po dobu pěti minut . Slijeme znovu tekutý podíl . Pomocí sterilní pipety vyzvednout peletu a přesunout ji do sterilní 1,5 ml mikrozkumavky . Pipeta ve 200 ul sterilní deionizované vody a nechatrozpustit DNA zcela v kapalině , která může trvat přes noc . Vzorek je poté připraven k analýze.