apikoplastu jsoutypu intracelulární organely přítomné v jednobuněčných parazitů, kteří způsobují závažná onemocnění , jako je malárie , toxoplazmózy a kokcidiózy . Organely jsou složité struktury uvnitř buňky , které nemohou růst a množit sami . Vznikly -lipředek parazitů zachvátil další organismus , který byl pravděpodobně v souvislosti s červené řasy . Vzhledem k tomu, apikoplastu nejsou nezávislé buňky , nemohou být pěstovány v kultuře, samy o sobě . Pro jejich růst je třeba pěstovat parazity . Co bude následovat, jsou instrukce ke kultuřečervená fáze krvinek Plasmodium falciparum , který způsobuje malaria.Things budete potřebovat
Parasite skladem
RPMI 1640 kultivačního média
laminárním prouděním
autoklávu
Albumax II sérum náhradní
D – glukóza
Hypoxantine
HEPES
Gentamicin -sulfát
kultivačních baněk
Cell inkubátor
Červené krvinky
Zobrazit další instrukce
kultivace Plasmodium falciparum
1
Nastavte inkubátoru na 37 stupňů Celsia a upravit složení plynu na 1 procento kyslíku , 3 procent oxidu uhličitého , a 96 procent dusíku .
2
autoklávu všechny non – sterilní vybavení a materiály
3
Práce v laminárním prouděním pro udržení sterility připravit konečné médium přidánímnásledujícího do RPMI 1640 kultivačního média :
D – glukózy na konečnou koncentraci 20 mM . celým
Hypoxantine na konečnou koncentraci 0,2 mM . celým
HEPES na konečnou koncentraci 25 mM . celým
Gentamicin -sulfát na konečnou koncentraci 25 mg /L.
Albumax II na konečnou koncentraci 0,5 procenta w /v.
4
rozdělily celkovou částku média bylo dosaženo v předchozí krok do tolika kultivačních baněk , jak si přál, a umístit je na třepačce v inkubátoru .
5
Postřední dosáhla 37 stupňů Celsia , přidejte parazita zásob .
6
Změňte kultivačního média každý den , aby parazity dobře živený a naživu .
7
Přidat červených krvinek každý druhý den . Budou napaden novými parazity , které jsou generovány v kultuře . Pokud se příliš mnoho na baňce , rozdělit jeho obsah do dvou nebo více dalších ty .